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層析柱的裝載步驟

更新時間:2012-12-04點擊次數(shù):1486

       層析柱適用于分子篩、離子交換、凝膠滲透與親和層析。隨著液相層析法進入血液制品生產(chǎn),利用層析法,可純化血漿中多種蛋白,例如白蛋白等等。層析柱也是生物化學(xué)、石油化工、化學(xué)分析、疾病診斷等實驗室及醫(yī)學(xué)制藥的中試及大規(guī)模生產(chǎn)*的佳層析工具。產(chǎn)品的裝載需要注意:

1.裝柱前要仔細看填料的使用說明書,每種填料都有自己的特性,以及特殊的裝柱方法,針對不同的空柱,也要注意方法可能不同;

2.填料要加水攪拌成均勻懸液,懸液濃度依填料而不同,一般70-85%,迅速倒入空柱內(nèi),或吸或壓,流速和具體步驟看說明書。

3.所有柱子盡量做到填料均勻,尤其是用于凝膠層析的柱子。裝柱完成后,可用柱效測定的方法檢查裝填效果。一個裝填合格的柱子的理論塔板高度應(yīng)是填料平均粒徑的2-4倍,在此范圍內(nèi)越小越好。

4.選擇合適的泵,**是流速滿足要求,脈沖盡量小。

5.準備上柱的液體應(yīng)進行過濾,至少是0.45m。

6.關(guān)于純化,**要考慮的是你的目標:純度、數(shù)量、速度、收率等等,再根據(jù)樣品的具體情況,尤其是目標蛋白的性質(zhì),確定純化策略。通常三步曲:*步先從大量或復(fù)雜樣品中將目標蛋白抓出,與主要雜質(zhì)分離;再用高選擇性的層析去除絕大部分雜質(zhì);后精細純化,提供純度至設(shè)定目標。到實際工作中,具體情況具體分析。

7.裝柱包括以后使用中不允許柱內(nèi)進入氣泡,柱頭事先也要排除氣泡。

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